Tiểu luận Phương pháp phát hiện dòng gen mục tiêu

BÀI TIỂU LUẬN PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN DÒNG GEN MỤC TIÊU CÁC THÀNH VIÊN TRONG NHÓM BÙI THỊ TÔN THẤT NGUYỄN VĂN KHOA LUYỆN THỊ NGÂN TRƯƠNG THỊ HUYỀN TRANG NGUYỄN XUÂN KHÁNH HUỲNH THỊ YẾN OANH MỞ ĐẦU CÁC PHƯƠNG PHÁP 1. LAI DNA 2. PHÉP THỬ MIỄN DỊCH 3. THỬ HOẠT TÍNH PROTEIN NỘI DUNG I_ MỞ ĐẦU Mục tiêu cơ bản của công nghệ sinh học phân tử là tách các gen mã hóa protein Kỹ thuật DNA tái tổ hợp là công cụ quan trọng của sinh học phân tử Qua các qui trình của kĩ thuật DNA tái tổ hợp tạo ra ngân hàng hệ gen của sinh vật. khi tách chiết DNA khỏi tế bào một sinh vật thì các gen của nó cũng được tách ra khỏi tế bào ngân hàng gen là tập hợp tấc cả trình tự DNA cấu thành bộ gen của sinh vật Đây chính là nguồn gen mục tiêu II. CÁC PHƯƠNG PHÁP NHẬN DẠNG 1. LAI DNA a.Chuẩn bị DNA đích Gắn với giá nền Làm biến tính ATCGTAGTCGTAGGTCGGTTAGCTTGAACC TAGCATCAGCATCCAGCCAATCGAACTTGG b. Chuẩn bị mẫu dò c. Lai ghép a.Chuẩn bị DNA đích 3’ Điện di trên gel Gắn với giá nền Làm biến tính 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ b. Chuẩn bị mẫu dò Chọn mẫu dò DNA nhân dòng từ vi sinh vật có họ hàng gần ( mẫu dò dị chủng ) Mẫu dò được tổng hợp hóa học, dựa trên trình tự Nucleotit được suy ra từ aa đã biết của Pr được mã hóa bởi gen đích Đánh dấu mẫu dò Mẫu dò đánh dấu sau đó được đưa vào dung dịch, thực hiện bước tiền lai nhằm hạn chế các mẫu bám vào nhau không đặc hiệu Sau đó là bước lai, màng sau khi lai được rửa để loại bỏ mẫu dò còn dư Phân tử DNA lai được nhận dạng trên màng bằng phép tự chụp ảnh phóng xạ Phát hiện vị trí của thực thể phóng xạ đánh dấu trong tế bào hoặc mẫu phân đoạn của các đại phân tử Đặt nguồn phóng xạ vào phim ảnh nhạy phóng xạ chứa bromua bạc Trong không gian tối, trên phim hiện ra vật liệu nằm dưới đó được đánh dấu phóng xạ Lai khuẩn lạc PHÉP THỬ MIỄN DỊCH Đĩa gốc 1.Chuyển tế bào 2.Phá vỡ tế bào và cho protein bám vào 3.Xử lý giá nền với kháng thể sơ cấp 4.Rửa trôi và xử lí giá nền 5. Rửa trôi và xem pư màu Giá nền Kháng thể sơ cấp Kháng thể thứ cấp THử MIễN DịCH 3. THỬ HOẠT TÍNH PROTEIN Gen đích tạo ra một enzym mà bình thường không được tổng hợp ở tế bào chủ, một phép thử điac trực tiếp có thể tiến hành để nhân dạng các thành viên của thư viện mang gen đặc hiệu mã hóa cho enzym đó Phép thử này tiến hành như sau các tế bào của thư viện bộ gen được cấy lên môi trường có bổ sung cơ chất đặc hiệu thủy phân cơ chất. Một phẩn ứng so màu nhận dạng khuẩn lạc mang gen đích VÍ DỤ Để phát hiện ra một gen Lipaza, các tế bào biến nạp được nuôi cấy với sự có mặt của trioleoglyxerol và thuốc nhuộm huỳnh quang rodamin B Thủy phân cơ chất, các khuẩn lạc dương tính sẽ có các vòng phát quang màu cam khi soi đưới ánh sáng cực tím Sách công nghệ sinh học phân tử. Bernard R. Glick và Jack J. Pasternak. Nhà xuất bản khoa học và kĩ thuật – 70 Trần Hưng Đạo, Hà Nội www.Bai giang dien tu. Bach kim.vn www. Homepage. Scm.edu www.google.com.vn Tài liệu tham khảo CẢM ƠN CÔ VÀ CÁC BẠN QUAN TÂM THEO DÕI