Đề tài Sử dụng các dòng vi khuẩn Pseudomonas fluorescensphòng trừ vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh trên cây cà chua

Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 1 Chöông 1 GIÔÙI THIEÄU 1.1 Ñaët vaán ñeà Caø chua laø moät trong soá nhöõng caây rau maøu quan troïng, ñöôïc phaân boá roäng raõi ôû nhieàu nöôùc treân theá giôùi. Tuy nhieân vieäc gieo troàng caø chua vaãn gaëp nhieàu khoù khaên, trôû ngaïi. Moät trong nhöõng nguyeân nhaân laøm haïn cheá söï phaùt trieån saûn xuaát vaø laøm giaûm naêng xuaát caø chua ñoù laø saâu vaø beänh haïi. Trong ñoù ñaùng chuù yù hôn caû laø beänh heùo ruõ do vi khuaån Ralstonia solanacearum gaây ra. Ñaây laø loaïi vi khuaån coù khaû naêng gaây haïi treân 200 loaøi caây coû, ñaëc bieät gaây haïi naëng treân caây hoï caø nhö caø chua, caø tím, khoai taây, thuoác laù vaø caùc caây khaùc hoï nhö ñaäu phuïng, göøng, chuoái, chuùng coù khaû naêng soáng raát laâu trong ñaát vaø laây lan raát nhanh, di chuyeån töø nôi nay sang nôi khaùc. Caây cheát haøng loaït khi laù vaãn coøn xanh gioáng nhö bò caét ngang goác. Öôùc tính thieät haïi cho saûn xuaát caây troàng haøng naêm do vi khuaån Ralstonia solanacearum gaây ra laø 15-95%(Emil Q.Javier, 1994). Ñeå khaéc phuïc tình traïng naøy, caùc bieän phaùp phoøng tröø taùc nhaân gaây beänh baèng phöông phaùp sinh hoïc ñöôïc nhieàu nhaø khoa hoïc quan taâm, nghieân cöùu. Ñaây laø moät trong nhöõng phöông phaùp phoøng choáng coù hieäu quaû nhaát hieän nay ôû khaû naêng phoøng tröø vi khuaån Ralstonia solanacearum, giuùp caây caø chua sinh tröôûng vaø phaùt trieån toát hôn, laøm cho taùc nhaân gaây beänh khoâng khaùng thuoác, an toaøn vôùi moâi tröôøng sinh thaùi cho keát quaû nhanh vaø chính xaùc raát phuø hôïp vôùi xu höôùng noâng nghieäp an toaøn hieän nay vaø ñang ñöôïc raát nhieàu nöôùc treân theá giôùi aùp duïng. Vieäc nghieân cöùu caùc loaïi vi khuaån ñoái khaùng nhö : Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas putida, ñeå choáng laïi vi khuaån Ralstonia solanacearum laø moät vaán ñeà heát söùc caàn thieát hieän nay. Vì vaäy, nghieân cöùu veà tính ña daïng cuûa caùc caù theå trong quaàn theå vi khuaån gaây beänh vaø söï löu haønh cuûa chuùng Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 2 ôû caùc vuøng saûn xuaát laø raát caàn thieát, noù laøm cô sôû khoa hoïc cho caùc giaûi phaùp phoøng choáng vaø choïn taïo gioáng khaùng beänh sau naøy. Xuaát phaùt töø thöïc tieãn treân vaø ñeå ñaùnh giaù khaû naêng phoøng tröø cuûa caùc doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens. Chuùng toâi thöïc hieän ñeà taøi: “Söû duïng caùc doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens phoøng tröø vi khuaån Ralstonia solanacearum gaây beänh heùo xanh treân caây caø chua”. 1.2 Muïc ñích – yeâu caàu Ñaùnh giaù khaû naêng phoøng tröø cuûa caùc doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum gaây beänh heùo xanh treân caây caø chua. 1.3 Giôùi haïn ñeà taøi Ñeà taøi ñöôïc thöïc hieän trong thaùng coù nhieàu möa, ñaát troàng bò nhieãm nhieàu loaïi beänh. Caây caø chua laø loaïi caây deã maãn caûm vôùi nhieàu loaïi beänh. 1.4 Ñoái töôïng nghieân cöùu Caùc doøng vi khuaån ñoái khaùng thuoäc nhoùm Pseudomonas fluorescens Doøng vi khuaån gaây beänh Ralstonia solanacearum Caây troàng: caø chua 1.5 Noäi dung nghieân cöùu Ñaùnh giaù khaû naêng ñoái khaùng cuûa caùc doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum treân ñóa petri trong phoøng thí nghieäm. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 3 Ñaùnh giaù khaû naêng phoøng tröø cuûa doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum treân caây caø chua trong ñieàu kieän nhaø löôùi. Ñaùnh giaù khaû naêng phoøng tröø cuûa doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum treân caây caø chua ngoaøi ñoàng ruoäng. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 4 Chöông 2 TOÅNG QUAN TAØI LIEÄU 2.1 Lòch söû nghieân cöùu beänh Vi khuaån Ralstonia solanacearum laø vi khuaån gaây beänh maïch daãn gaây haïi treân 200 loaøi caây coû. Halted ñaõ nghieân cöùu beänh naøy vaøo naêm 1892, naêm 1896 E.F.Smith nghieân cöùu, moâ taû, ñònh teân Pseudomonas solanacearum. Nhöõng naêm sau ñoù, beänh heùo ruõ ñöôïc nhieàu nhaø khoa hoïc treân theá giôùi ñi saâu, nghieân cöùu moät caùch toaøn dieän nhö Kelman 1953, Hayward 1964, Cook and Baker 1983, Yabuuchi 1992, 1995(Vuõ Trieäu Maân vaø Leâ Löông Teà, 1998). Beänh heùo ruõ do vi khuaån Ralstonia solanacearum treân caø chua coù teân laø: Southern wilt (theo caùch goïi cuûa ngöôøi Hoa Kyø), Bacterial wilt (theo caùch goïi cuûa ngöôøi Anh), ôû Vieät Nam goïi laø beänh heùo xanh, heùo ruõ. 2.2 Möùc ñoä phoå bieán vaø gaây haïi cuûa Ralstonia solanacearum Ngaøy nay, Ralstonia solanacearum ñöôïc ghi nhaän laø vi khuaån gaây haïi ôû haàu heát caùc chaâu luïc, phoå bieán laø ôû caùc nöôùc nhö Angola, Trung quoác, Bangladesh, Aán Ñoä, Indonesia, Srilanka, Ñoâng Aán Ethiopia, Lybia, Kenya, Malaysia, Nigieria, Philippin, Nam Phi, Ñaøi Loan, Thaùi Lan, Uganda, Hoa Kyø, Vieät Nam, Zambia (Subrhmagam, 1994). ÔÛ Vieät Nam, beänh heùo xanh caø chua do vi khuaån Ralstonia solanacearum gaây ra laø moät trong nhöõng beänh gaây haïi raát phoå bieán laøm cheát heùo haøng loaït caây caø chua treân ñoàng ruoäng, gaây toån thaát lôùn ôû caùc vuøng troàng caø chua trong nöôùc, nhaát laø ôû vuøng ñoàng baèng soâng Hoàng. Beänh ñöôïc ghi nhaän treân caø chua, khoai taây, caø tím, thuoác laù, ñaäu phuïng, göøng, ôùt. Qua moät soá keát quaû nghieân cöùu coâng boá gaàn ñaây cho Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 5 thaáy ôû nöôùc ta vi khuaån gaây beänh heùo xanh thuoäc division Chaâu AÙ (Leâ Löông Teà, 2002), race1, biovar 3 vaø 4 (Nguyeãn Thò Yeán, 2002). ÔÛ Hoa Kyø, vi khuaån Ralstonia solanacearum ñöôïc phaùt hieän treân khoai taây, thuoác laù ôû Florida ñöôïc xaùc ñònh baèng phöông phaùp PCR laø biovar 1 (Prakash, 2002). ÔÛ Indonesia, beänh ñöôïc phaùt hieän ñaàu tieân treân ñaäu phuïng vaøo naêm 1905, ôû vung Cirebon. Veà sau beänh ñöôïc ghi nhaän treân nhieàu loaïi caây troàng khaùc nhö caø chua, khoai taây, thuoác laù, ôùt, chuoái. Keát quaû nghieân cöùu beänh heùo xanh treân ñaäu phuïng giöõa AARD vaø ACIAR vaøo naêm 1985 cho raèng ñaây laø beänh chính treân ñaäu phuïng ôû Indonesia, söï thieät haïi do beänh gaây ra coù theå töø 15-90% naêng suaát (Wright, 1991). ÔÛ Ñaøi Loan beänh ñöôïc gaây haïi treân caø chua, khoai taây, thuoác laù, ôùt, caø tím, ñaäu phuïng, daâu taây, tía toâ, thaàu daàu, meø, cuû caûi, rau deàn vaø moät soá caây troàng khaùc. Treân nhieàu loaïi caây troàng söï thieät haïi do beänh gaây ra coù theå töø 5-100% naêng suaát. Caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum chuû yeáu thuoäc race1 (Yung-An Lee, 2001). ÔÛ Ai Caäp, beänh heùo xanh vi khuaån do Ralstonia solanacearum ñöôïc ghi nhaän laø gaây haïi naëng nhaát treân caø chua vaø a ti soâ trong nhöõng naêm gaàn ñaây, söï thieät haïi gaây ra treân a ti soâ töø 5-20% naêng suaát (Aly, 2000). 2.3 Sô löôïc veà vi khuaån Ralstonia solanacearum Vi khuaån Ralstonia solanacearum coù daïng hình gaäy, hai ñaàu hôi troøn, coù moät loâng roi ôû moät ñaàu, kích thöôùt 0,5-1,5µ, nhuoäm gram aâm laø loaøi vi sinh vaät toàn taïi ôû trong ñaát thöôøng xuyeân gaây ra caùc beänh cheát heùo (heùo ruõ, heùo xanh) treân nhieàu loaïi caây troàng nhö laïc, khoai taây, caø chua, ôùt, thuoác laù phoå bieán roäng ôû haàu heát khaép caùc vuøng, gaây taùc haïi lôùn cho saûn xuaát. Chuùng lan truyeàn theo nöôùc töôùi, xaâm nhaäp vaøo Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 6 caây qua caùc veát thöông vaø di chuyeån vaøo trong boù maïch. Beänh thöôøng xaûy ra vaøo luùc caây ñang taêng tröôûng. Vi khuaån phaùt trieån ôû nhieät ñoä töông ñoái cao, ñaát aåm, xaâm nhaäp qua veát thöông, sinh saûn ôû caùc boù maïch, kí chuû vaø di chuyeån ôû caùc boù maïch töø thaân ñeán laù, sinh ñoäc toá laøm caây heùo, cheát. Phaù boù maïch laøm taét ngeõn söï vaän chuyeån nöôùc vaø caùc chaát dinh döôõng, beänh haïi nhieàu treân ñaát caùt pha, ñaát thòt beänh nheï hôn. Treân nhöõng ruoäng troàng luaân canh vôùi caây luùa nöôùc beänh nheï. Vi khuaån thích hôïp ôû nhieät ñoä 30-370C, nhieät ñoä toái thieåu laø 100C, toái ña 410C, nhieät ñoä gaây cheát laø 520C, maãn caûm ñöôïc moâi tröôøng khoâ. 2.4 Söï phaân chia vi khuaån Ralstonia solanacearum theo ñaëc tính gaây haïi 2.4.1 Race Döïa treân phaïm vi kyù chuû ñöôïc chia laøm 4 race (Martin vaø French, 1997) + Race 1: Taán coâng treân nhieàu vuøng ñòa lyù, loaïi caây troàng khaùc nhau. Ñaëc bieät treân caùc caây nhö khoai taây, caø chua, caø tím, ôùt, thuoác laù, ñaäu phuïng. Vi khuaån Ralstonia solanacearum thuoäc race 1 thöôøng gaây haïi ôû nhöõng vuøng coù nhieät ñoä aám aùp vaø gaây haïi naëng ôû vuøng nhieät ñôùi. + Race 2: Chuû yeáu taán coâng treân caùc caây thuoäc hoï chuoái nhö chuoái tam boäi, chuoái laù, chuoái sôïi. + Race 3: Chuû yeáu taán coâng treân khoai taây. Khaùc vôùi race 1, race 3 thöôøng gaây haïi ôû nhöõng vuøng coù nhieät ñoä thaáp hôn vaø nhöõng vuøng coù vó ñoä cao. + Race 4: Ñöôïc ghi nhaän taán coâng treân caây daâu taèm (mulberry) ôû Trung Quoác. Söï phaân chia caùc race thöôøng raát phöùc taïp do phuï thuoäc vaøo thaành phaàn caây kyù chuû vaø phaïm vi phaân boá cuûa chuùng. Theo Martin vaø French (1997), race 1 löu Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 7 toàn nhieàu naêm trong ñaát, ngöôïc laïi race 3 thöôøng coù xu höôùng giaûm sau vaøi naêm neáu khoâng coù khoai taây daïi laøm kyù chuû. 2.4.2 Biovar Döïa vaøo ñaëc tính sinh lyù, sinh hoaù khaùc nhau cuûa caùc maãu phaân laäp, 5 biovar coù theå nhaän daïng döïa vaøo khaû naêng söû duïng vaø oxi hoaù 3 disaccharides (cellobiose, lactose, maltose) vaø 3 röôïu 6 cacbon (dulcitol, mannitol, sorbitol). Biovar 2 thöôøng bao goàm race 3, biovar 5 goàm race 4 vaø biovar 1, 3, 5 goàm race 1. 2.5 Trieäu chöùng gaây haïi cuûa vi khuaån Ralstonia solanacearum Trieäu chöùng thöôøng bieåu hieän ngay sau khi beänh xaâm nhaäp vaøo caây. ÔÛ caây bò beänh ban ngaøy laù maát maøu nhaün boùng, taùi xanh, heùo cuïp xuoáng, ôû giai ñoaïn caây con thöôøng bieåu hieän treân toaøn caây coøn ôû giai ñoaïn caây tröôûng thaønh trieäu chöùng thöôøng bieåu hieän ôû laù ngoïn tröôùc. ÔÛ 1-2 ngaøy ñaàu caây coù theå phuïc hoài laïi ñöôïc vaøo luùc trôøi maùt hoaëc veà ñeâm, nhöng sau 2-3 ngaøy laù heùo khoâng theå hoài phuïc laïi ñöôïc nöõa vaø toaøn caây bò heùo ruõ roài cheát. Caét ngang ñoaïn thaân caây gaàn maët ñaát ta thaáy boù maïch bò hoaù naâu, trong ñieàu kieän aåm ñoä cao thaân caây bò beänh daàn daàn thoái meàm, aán maïnh gaàn mieäng caét coù theå thaáy dòch nhôøn vi khuaån tieát ra maøu traéng söõa. Reã coù maøu naâu ñen vaø thoái. 2.6 Ñaëc ñieåm phaùt sinh phaùt trieån beänh Thôøi gian vi khuaån löu toàn trong ñaát phuï thuoäc nhieàu yeáu toá nhö aåm ñoä, nhieät ñoä, hoaù lyù ñaát. Beân caïnh ñoù coøn phuï thuoäc vaøo race gaây beänh, race 1 thöôøng löu toàn laâu trong ñaát traùi laïi race 3 thöôøng giaûm sau vaøi naêm do khaû naêng thích öùng thaáp hôn. Vi khuaån coù theå löu toàn trong ñaát töø 5-6 naêm, trong cô theå kyù chuû thöïc vaät hoaëc trong haït gioáng coù theå soáng tôùi 7 thaùng, coøn neáu baùm dính treân beà maët haït chæ toàn taïi 2-7 ngaøy (Vuõ Trieäu Maân vaø Leâ Löông Teà, 1998). Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 8 Vi khuaån xaâm nhaäp vaøo caây qua reã, veát thöông cô giôùi, thaân non, loã hôû töï nhieân, do coân truøng, khi vaøo beân trong chuùng sinh saûn raát nhanh laøm bít caùc loã maïch ñoàng thôøi tieát ra ñoäc toá laøm caùc boù maïch bò hoaù naâu, ñen vaø gaây ra hieän töôïng heùo do caây bò thieáu nöôùc. Döôùi nhöõng ñieàu kieän thuaän lôïi vi khuaån coù theå di chuyeån xuyeân qua lôùp voû vaø ñi ra beân ngoaøi moâi tröôøng ñaát, ñoù cuõng laø söï töông taùc giöõa ñaát vaø reã, reã bò nhieãm vi khuaån töø ñaát vaø ngöôïc laïi vi khuaån töø trong caây ñi ra moâi tröôøng ñaát (Leâ Löông Teà vaø Vuõ Trieäu Maân, 1999). Vi khuaån lan truyeàn chuû yeáu baèng nguoàn nöôùc, ñaát nhö baùm dính vaøo giaày deùp, duïng cuï canh taùc (Martin vaø French, 1997). Beänh heùo xanh vi khuaån phaùt sinh phaùt trieån phuï thuoäc vaøo ñieøu kieän ñaát ñai nhö treân caùc chaân ñaát cao beänh thöôøng naëng hôn caùc chaân ñaát thaáp, ñaát ñöôïc luaân canh vôùi luùa nöôùc laøm giaûm tæ leä beänh ñaùng keå (Ñoã Taán Duõng, 2001). Thôøi vuï troàng cuõng laø yeáu toá quan troïng aûnh höôûng ñeán söï phaùt sinh phaùt trieån beänh, thôøi vuï troàng coù möa nhieàu, aåm ñoä cao laøm gia taêng söï phaùt sinh phaùt trieån beänh. Maät ñoä troàng cao tæ leä beänh thöôøng cao do chuùng taïo moät vuøng khí haäu thuaän lôïi cho söï phaùt sinh phaùt trieån beänh. Vì nöôùc laø nguoàn laây lan chuû yeáu cuûa beänh, do ñoù phöông phaùp töôùi laø moät trong nhöõng yeáu toá gia taêng tæ leä gaây haïi cuûa beänh. 2.7 Bieän phaùp phoøng tröø 2.7.1 Bieän phaùp hoaù hoïc Hieän nay, vaãn chöa coù loaïi thuoác naøo ñaëc hieäu ñeå phoøng tröø beänh heùo xanh treân caây caø chua, tuy nhieân bieän phaùp hoaù hoïc vaãn ñöôïc xem laø caàn thieát hieän nay, nhöng xeùt veà laâu daøi bieän phaùp hoaù hoïc ngaøy caøng theå hieän caùc maët traùi cuûa noù nhö laøm cho taùc nhaân gaây beänh trôû neân khaùng thuoác, ñaëc bieät laø gaây oâ nhieãm moâi Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 9 tröôøng vaø söùc khoûe con ngöôøi moät caùch nghieâm troïng. Duøng formol, Mocap 10G, Furadan 3H, voâi, CuSO4 xöû lyù ñaát. Duøng thuoác: Kasuran, Rovral, Dithan. 2.7.2 Bieän phaùp sinh hoïc Khi söû duïng thuoác hoaù hoïc ñeå baûo veä thöïc vaät thì thuoác seõ taïo thaønh moät lôùp moûng treân beà maët laù, quaû, thaân caây, maët ñaát, maët nöôùc vaø moät lôùp chaát laéng goïi laø dö löôïng ban ñaàu cuûa thuoác vì vaäy bieän phaùp sinh hoïc trong coâng taùc baûo veä thöïc vaät ngaøy caøng chuù yù khai thaùc vaø vò trí cuûa bieän phaùp nay ngaøy caøng ñöôïc naâng cao. Vieäc baûo veä moâi tröôøng soáng, moâi tröôøng saûn xuaát cuõng nhö tieán haønh noâng nghieäp saïch thì bieän phaùp naøy caøng coù yù nghóa hôn. Söû duïng moät soá vi khuaån ñoái khaùng nhö Bacillus sudtilis, Pseudomonas fluorescens ñeå xöû lí haït tröôùc khi gieo, nhuùng reå caây con tröôùc khi troàng hoaëc ñöa vi sinh vaät ñoái khaùng vaøo vuøng reã sau troàng nhaèm öùc cheá, caïnh tranh vaø tieâu dieät vi khuaån Ralstonia solanacearum (Ñoã Taán Duõng, 2001). Söû duïng cheá phaåm V58 coù chöùa vi sinh vaät ñoái khaùng treân ruoäng troàng caø chua ôû Tieàn Phong - Meâ Linh - Vónh Phuùc, keát quaû thu ñöôïc coù coâng thöùc söû duøng V58 tæ leä cheát giaûm coøn 25% so vôùi ñoái chöùng 80% (Leâ Nhö Kieåu, 2001). Ngoaøi ra, chuùng ta caàn phaûi laøm ñaát vöôøn öôm saïch beänh, caøy böøa kyõ, boùn ñaïm vöøa phaûi, phaân chuoàng phaûi uû hoai, luaân canh vôùi caây luùa nöôùc vaø duøng thuoác moät caùch hôïp lyù. 2.8 Phoøng tröø sinh hoïc beänh caây 2.8.1 Khaùi nieäm phoøng tröø sinh hoïc beänh caây Theo Cook vaø Baker (1983), phoøng tröø sinh hoïc beänh caây (PTSHBC) laø thoâng qua vieäc söû duïng moät hoaëc nhieàu sinh vaät (ngoaïi tröø con ngöôøi) ñeå khoáng cheá maàm beänh hay laøm giaûm söï sinh tröôûng vaø phaùt trieån cuûa moät taùc nhaân gaây haïi naøo ñoù. Ñeán naêm 1988, Cook ñaõ ñöa ra moät khaùi nieäm roäng hôn veà phoøng tröø sinh Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 10 hoïc. Theo oâng PTSHBC laø vieäc söû duïng sinh vaät, gen vaø caùc saûn phaåm cuûa gen ñeå ñieàu khieån taùc nhaân gaây beänh. Caùc caùch ñieàu khieån taùc nhaân gaây beänh coù theå laø: (i) duy trì maät soá nguoàn beänh ôû möùc thaáp döôùi ngöôõng kinh teá, (ii) laøm chaäm hoaëc loaïi tröø tieán trình xaâm nhieãm cuûa beänh, (iii) kích hoaït vaø taïo ñieàu kieän phaùt huy heä thoáng töï veä cuûa caây. 2.8.2 Löïa choïn taùc nhaân phoøng tröø sinh hoïc Chieán löôïc PTSHBC coù theå chia thaønh hai loaïi (1) chieán löôïc döïa treân nguyeân taéc cô baûn veà sinh thaùi hoïc hay coøn goïi laø phoøng tröø sinh hoïc coå ñieån (Hokkaness vaø Lynch, 1995) hay phoøng tröø sinh hoïc chæ xöû lyù moät laàn (Cook, 1993), (2) chieán löôïc söû duïng vi sinh vaät nhö laø moät loaïi thuoác sinh hoïc vaø vieäc xöû lyù coù nhöõng ñieåm gaàn gioáng nhö xöû lyù thuoác hoaù hoïc nhaèm muïc ñích kieåm soaùt beänh trong moät khoaûng thôøi gian giôùi haïn. Chieán löôïc naøy coøn ñöôïc goïi laø phoøng tröø sinh hoïc taêng daàn (Hokkaness vaø Lynch, 1995). Söï khaùc nhau veà chieán löôïc phoøng tröø aûnh höôûng ñeán söï löïa choïn vaø phöông phaùp saøng loïc taùc nhaân phoøng tröø sinh hoïc. Ñoái vôùi chieán löôïc PTSHBC taêng daàn, ngöôøi ta chuù yù ñeán nguoàn goác cuûa vi sinh vaät ñoái khaùng. Tuy nhieân nhöõng hieåu bieát veà khía caïnh naøy laø ñieàu caàn thieát cho vieäc ñaùnh giaù ruûi ro vaø laø moät trong nhöõng yeâu caàu caàn thieát cho quaù trình ñaêng kyù thöông maïi hoaù saûn phaåm (Lumsden vaø Lewis, 1989). Coù moät soá phöông phaùp saøng loïc taùc nhaân phoøng tröø sinh hoïc döïa treân hoaït tính cuûa men thuûy phaân cuûa vi sinh vaät ñoái khaùng, töông taùc giöõa vi sinh vaät gaây beänh vaø vi sinh vaät ñoái khaùng, phöông phaùp coù lieân quan ñeán caây kí chuû. 2.8.3 Vi khuaån - moät taùc nhaân phoøng tröø sinh hoïc: Nhieàu coâng trình nghieân cöùu veà caùc taùc nhaân phoøng tröø sinh hoïc ñaõ coâng boá töø daàu theá kyû 20 trong ñoù coù vi khuaån. Ñang laø nhoùm vi khuaån hoaïi sinh maø phoå Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 11 bieán nhaát laø Pseudomonas spp., keá ñeán laø Bacillus spp. vaø Streptomyces (Burr vaø ctv, 1978, Weller vaø Cook, 1983). Nhöõng nghieân cöùu veà vi khuaån vuøng reã vaø vi khuaån treân thaân laù caây ñaõ daãn ñeán vieäc chia chuùng thaønh ba loaïi: loaïi coù haïi cho caây, loaïi trung tính vaø loaïi coù ích cho caây. Aûnh höôûng coù ích cuûa nhoùm vi khuaån naøy laø do chuùng saûn sinh ra chaát kích thích taêng tröôûng caây, caùc chaát öùc cheá hoaëc laøm suy yeáu taùc nhaân gaây beänh hoaëc caû hai (Baker, 1988). Cô cheá ban ñaàu öùc cheá taùc nhaân gaây beänh laø tieát ra caùc chaát khaùng sinh (Fravell, 1988). Tuy nhieân nhöõng yeáu toá khaùc nhö vieäc tieát ra chaát sidrophores, HCN, söï caïnh tranh dinh döôõng cuõng coù vai troø quan troïng trong vieäc öùc cheá taùc nhaân gaây beänh (Cook vaø Baker, 1983). Trong soá caùc loaøi Pseudomonas spp., Pseudomonas fluorescens ñöôïc chuù yù vaø taêng cöôøng nghieân cöùu hôn heát, vì ngoaøi khaû naêng ñoái khaùng vôùi 10 loaïi naám beänh löu toàn trong ñaát, loaøi vi khuaån naøy coù khaû naêng kích thích söï phaùt trieån caây troàng. Baèng caùch xöû lyù haït coù hay khoâng coù chaát mang hoaït chuûng vaøo ñaát cuøng vôùi giaù theå laøm thöùc aên neàn, ñaõ laøm giaûm möùc traàm troïng cuõa beänh, laøm gia taêng söï phaùt trieån vaø taêng naêng suaát caây troàng. Vôùi thuaän lôïi laø coù nhieàu cô cheá taùc duïng nhö: ñònh cö, chieám choã, loaïi tröø maàm beänh ra khoûi vuøng thích hôïp, tieát chaát khaùng sinh (Pyrrolnitrin, pyoluteorin) ngoaïi kyù sinh, caïnh tranh dinh döôõng (hôïp chaát saét), gia taêng söùc ñeà khaùng cho caây, Pseudomonas raát coù trieån voïng söû duïng treân laõnh vöïc thöông maïi. Bieän phaùp sinh hoïc trong phoøng tröø beänh caây laø ñieàu khieån moâi tröôøng, caây troàng vaø sinh vaät ñoái khaùng moät caùch thích hôïp, ñeå taïo neân moät theá caân baèng sinh hoïc caàn thieát, giuùp giaûm maät soá cuûa maàm beänh xuoáng döôùi ngöôõng gaây haïi. Nhôø ñoù, beänh cuûa caây troàng chæ xuaát hieän ôû möùc ñoä nheï, khoâng gaây aûnh höôûng quan troïng veà maët kinh teá. Bieän phaùp sinh hoïc khoâng coù muïc ñích tieâu dieät toaøn boä maàm beänh, vaø cuõng khoâng coù khaû naêng naøy (Phaïm Vaên Kim, 1999). Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 12 2.8.4 Tình hình nghieân cöùu trong vaø ngoaøi nöôùc: 2.8.4.1Nghieân cöùu trong nöôùc: Leâ Löông Teà, 2002 nghieân cöùu “phoøng choáng beänh heùo xanh vi khuaån caø chua coù hieäu quaû kinh teá cao baèng bieän phaùp söû duïng roäng raõi caùc gioáng caø chua khaùng beänh, coù naêng suaát cao CLN-1462A vaø P.T4719A ôû vuøng ñoàng baèng soâng Hoàng”. Ñaõ ñöa vaøo troàng ñaïi traø ôû caùc tænh thuoäc ñoàng baèng soâng Hoàng vaø caùc tænh phía Baéc nöôùc ta. Leâ Nhö Kieåu, Nguyeãn Ngoïc Cöôøng, Ñaøo Thu Haèng, 2003 nghieân cöùu “phaùt hieän biovar 1 vaø 5 trong quaàn theå vi khuaån Ralstonia solanacearum gaây beänh heùo xanh caø chua”. Ñieàu naøy cho thaáy quaàn theå gaây beänh heùo xanh caø chua ôû Vieät Nam laø raát ña daïng (coù 5 biovar). Phaïm Minh Sang, 2003 nghieân cöùu “Hieäu löïc cuûa vi khuaån ñoái khaùng vaø kích thích sinh tröôûng trong phoøng tröø beänh khoâ vaèn do naám Rhizoctonia solani” böôùc ñaàu ñaõ khoáng cheá ñöôïc beänh khoâ vaèn cho luùa vaø kích thích caây taêng tröôûng maïnh baèng VKÑK. Nguyeãn Trung Thaønh, 2004 cuõng ñaõ thaønh coâng trong vieäc nghieân cöùu “Böôùc ñaàu choïn loïc vaø ñaùnh giaù doøng VKÑK, phaân laäp töø ñaát ñeå khoáng cheá naám Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, vaø vi khuaån Ralsronia solanacearum gaây beänh treân caây caø chua”. Caùc doøng VKÑK coù khaû naêng khaùng vôùi caû ba taùc nhaân gaây beänh trong ñieàu kieän In vitro vaø trong nhaø löôùi VKÑK ñaõ khoáng cheá ñöôïc beänh do naám Sclerotium rolfsii gaây ra. Phaïm Myõ Lieân, 2004 nghieân cöùu veà vaán ñeà “Choïn loïc vaø ñaùnh giaù doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens ñoái khaùng vôùi naám Sclerotium rolfsii gaây beänh treân caây caø chua” cuõng ñaõ thaønh coâng trong quaù trình nghieân cöùu. 2.8.4.2 Nghieân cöùu ngoaøi nöôùc Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 13 Taïi Ñaøi Loan, baèng phöông phaùp PCR vôùi caëp primer PS-IS ñaëc hieäu vôùi vi khuaån Ralstonia solanacearum thuoäc race 1, keát quaû phaân tích cho thaáy taát caû caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum thu thaäp treân caø chua, khoai taây, ôùt, ñaäu phoäng, caø tím, thuoác laù, daâu taây, chuoái vaø nhieàu loaïi caây troàng khaùc ñeàu thuoäc race 1 (Yang An Lee, 2001). Phaân tích treân 120 doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum phaân laäp treân caø chua, khoai taây, caø tím, ôùt, chuoái, göøng vaø nhieàu loaïi caây troàng khaùc töø Chaâu Aù, Myõ, Aâu, Phi vaø Chaâu Ñaïi Döông cho thaáy vi khuaån Ralstonia solanacearum thuoäc division Chaâu Aù thöôøng bao goàm biovar 3 vaø 4, division Chaâu Myõ thöôøng bao goàm biovar 1 vaø 2. Theo Rindran vaø Vidhiaekaran (1996) cho raèng nhöõng loaïi vi khuaån Pseudomonas fluorescens ñöôïc phaân laäp töø vuøng reã, coù saéc toá phaùt huyønh quang vaøng xanh cuõng kìm haõm söï phaùt trieån cuûa naám Rhizoctonia solani. Moät trong nhöõng doøng coù hieäu quaû nhaát laø PFAIR2, phaân laäp treân than buøn ñöôïc duøng ñeå xöû lyù haït, xöû lyù reå, raûi vaøo ñaát vaø phun treân laù. Töøng nghieäm thöùc rieâng leû ñaõ kieåm soaùt beänh coù hieäu quaû. Tuy nhieân, söï keát hôïp cuûa boán caùch daãn ñeán hieäu quaû phoøng tröø toát nhaát trong nhaø löôùi. Treân ñoàng ruoäng, söû duïng PFAIR2 phoøng tröø beänh coù hieäu quaû, gia taêng naêng suaát vaø coù theå so saùnh vôùi caùc loaïi thuoác tröø naám thoâng duïng nhö carbendazim. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 14 Chöông 3 VAÄT LIEÄU VAØ PHÖÔNG PHAÙP NGHIEÂN CÖÙU 3.1 Thôøi gian vaø ñòa ñieåm nghieân cöùu 3.1.1 Thôøi gian Ñeà taøi ñöôïc thöïc hieän töø ngaøy 5/6/2005 – 30/8/2005 3.1.2 Ñòa ñieåm - Nôi tieán haønh nghieân cöùu: Coâng ty Hai Muõi Teân Ñoû thuoäc coâng ty gioáng Ñoâng Taây, xaõ Nhuaän Ñöùc, huyeän Cuû Chi, Thaønh Phoá Hoà Chí Minh. - Nôi phaân laäp vaø nuoâi caáy: Phoøng thöïc taäp Beänh caây – Boä moân Baûo Veä Thöïc Vaät – Tröôøng Ñaïi hoïc Noâng Laâm Thaønh Phoá Hoà Chí Minh. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 15 - Nôi phaân tích: Trung taâm phaân tích thí nghieäm hoaù sinh – Tröôøng Ñaïi hoïc Noâng Laâm Thaønh Phoá Hoà Chí Minh. 3.2 Phöông phaùp nghieân cöùu 3.2.1 Vaät lieäu nghieân cöùu Ñoái töôïng nghieân cöùu: caùc doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens ñoái khaùng: 18, 73, 85, 123, 124, 187 vaø caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum gaây beänh: RST004, RST005, RST006, RST01, RSBog3, RSBog4. Haït caø chua vôùi tyû leä naåy maàm 90%. Moâi tröôøng phaân laäp vaø nuoâi caáy: - PDA (potato, dextrose, agar) - LB (tryptone, yeast extract, sodium chloride) - WA (water, agar) Vaät lieäu laây nhieãm: haït gioáng caø chua (1628) 3.2.2 Phöông phaùp ñaùnh giaù khaû naêng ñoái khaùng cuûa caùc doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum treân ñóa petri trong phoøng thí nghieäm Ñieàu kieän tieán haønh: thí nghieäm ñöôïc tieán haønh trong phoøng thí nghieäm taïi Phoøng Thöïc taäp Beänh caây – Boä moân Baûo veä Thuïc vaät – Tröôøng Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. Hoà Chí Minh. Vaät lieäu nghieân cöùu: - Caùc doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens:18, 73, 85, 123, 124. - Caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum: RST004, RST005, RST006, RST01, RSBog3, RSBog4. Duïng cuï thí nghieäm: Que trang vi khuaån, pipet vaø ñaàu tieáp ñaõ ñöôïc voâ truøng. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 16 Moâi tröôøng söû duïng: PDA (200g Potato, 15g Agar, 20g Dextrose vaø 1 lít nöôùc caát). Phöông phaùp tieán haønh: Laáy 100µl caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum tran ñeàu treân moâi tröôøng PDA ñaõ chuaån bò saün. Duøng pipet huùt 20µl dòch vi khuaån vaø tieán haønh caáy dòch vi khuaån thaønh 5 ñieåm töông öùng vôùi caùc doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens ñaõ chuaån bò saün. Cuoái cuøng ñem uû ôû nhieät ñoä phoøng (27-300C), khoaûng 24 giôø sau xem keát quaû ñoái khaùng cuûa caùc doøng vi khuaån. Chæ tieâu theo doõi: Khaû naêng ñoái khaùng cuûa 5 doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens 3.2.3 Phöông phaùp ñaùnh giaù khaû naêng phoøng tröø cuûa doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum treân caây caø chua trong nhaø löôùi Thí nghieäm ñöôïc tieán haønh trong ñieàu kieän nhaø löôùi taïi coâng ty Hai Muõi Teân Ñoû. Vaät lieäu nghieân cöùu: - Nguoàn vi khuaån khaùng maïnh nhaát vaø gaây ñoäc maïnh nhaát ñöôïc choïn loïc trong phoøng thí nghieäm. - Haït caø chua vôùi tæ leä naûy maàm 90%. - Ñaát. - Chaäu nhöïa 7x12cm (ñöôøng kính x chieàu cao). - Khay xoáp (60 loå). Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 17 - Trang thieát bò thí nghieäm taïi phoøng thöïc taäp Beänh caây – Boä moân Baûo Veä Thöïc Vaät vaø taïi trung taâm phaân tích thí nghieäm Hoaù Sinh tröôøng Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp.Hoà Chí Minh. Moâi tröôøng söû duïng: LB loûng (tryptone, yeast extract, sodium chloride). Phöông phaùp tieán haønh: Laây nhieãm theo phöông phaùp cuûa Phaïm Ñaêng Minh (2003) coù caûi tieán - Sau khi khaûo saùt tính ñoäc cuûa caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum trong phoøng thí nghieäm, ta choïn ra caùc doøng gaây ñoäc cho caây caø chua vaø choïn ra moät doøng maïnh nhaát. Töông töï, ta cuõng choïn ra moät doøng VKÑK maïnh nhaát. - Nguoàn vi khuaån: töø nguoàn vi khuaån tröõ ôû -800C, nuoâi caáy treân moâi tröôøng LB loûng khoaûng 16 giôø, ly taâm thu vi khuaån ôû 3000 voøng/phuùt, hoaø vi khuaån vaøo nöôùc caát voâ truøng. - Haït gioáng caø chua ñöôïc röûa baèng coàn 70% trong 1 phuùt, NaOCl 2% trong 5 phuùt, sau ñoù röûa laïi nhieàu laàn vôùi nöôùc caát voâ truøng, uû haït treân giaáy thaám ñöôïc laøm aåm baèng nöôùc caát voâ truøng ñaët trong ñóa petri, giöõ ôû nhieät ñoä 270C. - Laáy haït caø chua ñaõ naåy maàm khoaûng 0,5 – 2mm ngaâm trong dòch huyeàn phuø ñaõ chuaån bò ôû treân, noàng ñoä 109 cfu/ml vi khuaån ñoái khaùng (khoaûng 20 phuùt) ñaõ chuaån bò saün, sau ñoù laøm khoâ haït treân giaáy thaám ñem gieo khay xoáp ñaõ chuaån bò saün ñaát (khay 60 loå). - Khi caây caø chua ñöôïc 15 ngaøy tuoåi ñem troàng vaøo chaäu ñaát ñaõ coù chuûng saün dung dòch vi khuaån gaây ñoäc, vôùi maät soá vi khuaån: 103 cfu/g ñaát, caùc caây caø chua ñöôïc chia thaønh 4 nghieäm thöùc, moãi nghieäm thöùc 30 caây, vôùi 3 laàn laëp laïi. Tieán haønh theo doõi trong voøng 20 ngaøy. Chæ tieâu theo doõi: Chieàu cao caây: ño töø hai laù maàm leân ñeán ñaàu ngoïn laù, 5 ngaøy/laàn. Soá laù: ñeám toaøn boä soá laù treân caây, 5 ngaøy/laàn. Caùc nghieäm thöùc: Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 18 NT1 (T1): khoâng xöû lyù vi khuaån gaây beänh vaø ñoái khaùng. NT2 (T2): chæ xöû lyù vi khuaån gaây beänh trong ly ñaát. NT3 (T3): xöû lyù vi khuaån ñoái khaùng ôû giai ñoaïn haït nöùt nanh vaø vi khuaån gaây beänh trong ly ñaát. NT4 (T4): xöû lyù vi khuaån ñoái khaùng ôû giai ñoaïn haït nöùt nanh, tröôùc khi troàng vaøo ly ñaát ñaõ chuûng saün vi khuaån gaây beänh tieán haønh nhuùng caây caø chua vaøo dòch vi khuaån ñoái khaùng ñaõ chuaån bò saün vôùi maät soá 109 cfu/ml, (khoaûng 20 phuùt). 3.2.4 Phöông phaùp ñaùnh giaù tính ñoäc cuûa vi khuaån Ralstonia solanacearum treân caây caø chua trong ñieàu kieän nhaø löôùi Caùc phöông phaùp ñaùnh giaù gioáng nhö muïc 3.2.3 nhöng chuûng vi khuaån gaây ñoäc vôùi maät soá vi khuaån: 1010 cfu/g ñaát, tieán haønh theo doõi trong 12 ngaøy sau troàng. Chæ tieâu theo doõi: Tyû leä cheát cuûa caây caø chua (%) 3.2.5 Phöông phaùp ñaùnh giaù khaû naêng phoøng tröø cuûa doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum treân caây caø chua ngoaøi ñoàng ruoäng. Thí nghieäm ñöôïc tieán haønh ngoaøi ñoàng ruoäng taïi coâng ty Hai Muõi Teân Ñoû. Vaät lieäu nghieân cöùu: - Nguoàn VKÑK maïnh nhaát ñöôïc choïn loïc trong phoøng thí nghieäm. - Haït caø chua vôùi tæ leä naåy maàm 90%. - Ñaát ñöôïc leân luoáng, phuû baït vaø ñuïc loå ñaõ chuaån bò tröôùc. - Khay xoáp (60 loå). Phöông phaùp tieán haønh: Khi caây ñöôïc 15 ngaøy tuoåi ñem troàng ngoaøi ñoàng ruoäng, caùc caây caø chua ñöôïc chia thaønh 2 nghieäm thöùc, sau troàng 3 ngaøy töôùi dòch VKÑK. Tieán haønh theo doõi trong 20 ngaøy sau troàng. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 19 Chæ tieâu theo doõi: Tyû leä cheát cuûa caây caø chua (%) Caùc nghieäm thöùc: - NT1 (T1’): caùc caây caø chua, vôùi 3 laàn laëp laïi, moãi laàn laëp laïi 20 caây. Khoâng chuûng vi khuaån ñoái khaùng vaø gaây beänh. - NT2 (T2’): caùc caây caø chua, vôùi 3 laàn laëp laïi, moãi laàn laëp laïi 80 caây. Coù chuûng vi khuaån ñoái khaùng. Sô ñoà boá trí thí nghieäm: T1’ T2’ T2’ T1’ T2’ T2’ T1’ Ghi chuù: T1’: ñoái chöùng T2’ : xöû lyù VKÑK 3.2.6 Phöông phaùp xöû lyù soá lieäu Caùc soá lieäu ñöôïc xöû lyù baèng phaàn meàm MSTATC. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 20 Chöông 4 KEÁT QUAÛ VAØ THAÛO LUAÄN 4.1 Möùc ñoái khaùng cuûa caùc doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum treân ñóa petri Treân ñóa petri coù chöùa moâi tröôøng PDA duøng que tran vi khuaån tran ñeàu 6 doøng VKGB, sau ñoù tieán haønh caáy thaønh 5 ñieåm ñaõ ñaùnh daáu tröôùc töông öùng vôùi 5 doøng VKÑK ñeå xaùc ñònh möùc ñoä ñoái khaùng cuûa 5 doøng vi khuaån. Keát quaû ñöôïc tình baøy ôû baûng 4.1. Baûng 4.1 Möùc ñoä ñoái khaùng cuûa 5 doøng vi khuaån treân ñóa petri Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 21 DVKGB DVKÑK RST004 RST005 RST006 RST01 RSBog3 RSBog4 18 +++ +++ +++ +++ +++ ++ 73 +++ ++ +++ +++ +++ +++ 85 +++ +++ +++ +++ +++ +++ 123 ++ + + ++ + + 124 ++ ++ + ++ + + Chuù thích: (+++): khaùng maïnh (++): khaùng trung bình (+): khaùng yeáu DVKGB: doøng vi khuaån gaây beänh DVKÑK: doøng vi khuaån ñoái khaùng Caùc doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum: RST004, RST005, RST006, RST01, RSBog3, RSBog4. Caùc doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens: 18, 73, 85, 123, 124. Trong caùc doøng VKÑK Pseudomonas fluorescen coù 5 doøng ñeàu coù khaû naêng ñoái khaùng vôùi caùc doøng VKGB Ralstonia solanacearum, coù 3 doøng ñoái khaùng maïnh, 2 doøng coøn laïi coù möùc ñoä khaùng töø trung bình ñeán yeáu. Nhö vaäy, trong 5 doøng VKÑK coù 3 doøng khaùng maïnh, tieáp tuïc nghieân cöùu 3 doøng naøy vaø choïn ra moät doøng maïnh nhaát. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 22 Hình 4.1: Khaû naêng ñoái khaùng cuûa 5 doøng VKÑK ñoái vôùi VKGB RSBog3 Hình 4.2: Khaû naêng ñoái khaùng cuûa 5 doøng VKÑK ñoái vôùi VKGB RSBog4 Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 23 Hình 4.3: Khaû naêng ñoái khaùng cuûa 5 doøng VKÑK ñoái vôùi VKGB RST01 Hình 4.4: Khaû naêng ñoái khaùng cuûa 5 doøng VKÑK ñoái vôùi VKGB RST004 Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 24 Hình 4.5: Khaû naêng ñoái khaùng cuûa 5 doøng VKÑK ñoái vôùi VKGB RST005 Hình 4.6: Khaû naêng ñoái khaùng cuûa 5 doøng VKÑK ñoái vôùi VKGB RST006 Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 25 Hình 4.7: Khaû naêng ñoái khaùng cuûa doøng VKÑK 85 vôùi doøng VKGB RST01 Hình 4.8: Khaû naêng ñoái khaùng cuûa doøng VKÑK 85 vôùi doøng VKGB RST004 Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 26 4.2 Ñaùnh giaù khaû naêng phoøng tröø cuûa doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum treân caây caø chua trong ñieàu kieän nhaø löôùi Xöû lyù ñaát baèng vi khuaån RST01 vôùi maät soá vi khuaån 103 cfu/gñaát. Sau ñoù tieán haønh troàng caø chua vaøo chaäu ñaát ñeå xaùc ñònh khaû naêng ñoái khaùng cuûa doøng vi khuaån 85. Keát quaû ñöôïc trình baøy ôû baûng 4.2, 4.3. Baûng 4.2 Söùc taêng tröôûng veà chieàu cao caây Chieàu cao trung bình (cm) Nghieäm thöùc 5 NST 10 NST 15 NST 20 NST T1 20,2 B 30,3 BC 35,3 B 38,0 B T2 20,3 B 25,2 C 25,8 B 26,8 C T3 25,3 AB 40,3 AB 47,3 A 58,5 A T4 29,0 A 46,0 A 53,2A 60,8 A CV% 13,26 9,77 8,99 7,83 Ghi chuù: Trong cuøng moät coät caùc chöõ soá theo sau cuøng kyù töï thì söï sai bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ. T1: ñoái chöùng T2: chæ xöû lyù VKGB T3, T4 : xöû lyù VKGB vaø VKÑK NST: Ngaøy sau troàng CV%: Heä soá bieán thieân Töø keát quaû baûng 4.2 coù moät soá nhaän xeùt sau: - Giai ñoaïn 5 NST chieàu cao giöõa caùc nghieäm thöùc söï sai bieät coù yù nghóa veà maët thoáng keâ. Cao nhaát laø T4 (29,0 cm) vaø khoâng sai bieät veà maët thoáng keâ vôùi nghieäm thöùc T3. Thaáp nhaát laø T1 (20,2 cm) vaø khoâng sai bieät veà maët thoáng keâ vôùi nghieäm thöùc T2. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 27 - Giai ñoaïn 10 NST chieàu cao giöõa caùc nghieäm thöùc söï khaùc bieät coù yù nghóa veà maët thoáng keâ. Cao nhaát laø T4 (46,0 cm) vaø khoâng sai bieät veà maët thoáng keâ vôùi T3, thaáp nhaát laø T2 (25,2 cm) vaø khoâng sai bieät veà maët thoáng keâ vôùi T1. - Giai ñoaïn 15 NST toác ñoä taêng tröôûng chieàu cao giöõa caùc nghieäm thöùc söï khaùc bieät coù yù nghóa veà maët thoáng keâ. Thaáp nhaát laø T2 (25,8 cm) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ vôùi T1, cao nhaát laø T4 (53,2 cm). - Giai ñoaïn 20 NST, T4 coù chieàu cao cao nhaát (60,8 cm) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ vôùi T3. Thaáp nhaát laø T2 (26,8 cm) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ vôùi T1. Baûng 4.3 Toác ñoä ra laù cuûa caây Soá laù trung bình/caây Nghieäm thöùc 5 NST 10 NST 15 NST 20 NST T1 19,7 B 28,7 B 38,0 BC 43,7 BC T2 16,0 B 24,0 B 25,7 C 31,7 C T3 21,7 AB 32 AB 45,7 AB 60,0 AB T4 27,0 A 42,7 A 52,7 A 68,0 A CV% 10,46 13,64 10,74 11,70 Ghi chuù: Trong cuøng moät coät caùc chöõ soá theo sau cuøng kyù töï thì söï sai bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 28 T1: ñoái chöùng T2: chæ xöû lyù VKGB T3, T4 : xöû lyù VKGB vaø VKÑK NST: Ngaøy sau troàng CV%: Heä soá bieán thieân Töø keát quaû ôû baûng 4.3 coù moät soá nhaän xeùt sau: - ÔÛ giai ñoaïn 5 NST soá laù caø chua giöõa caùc nghieäm thöùc söï sai bieät coù yù nghóa veà maët thoáng keâ. Nhieàu nhaát laø T4 (27,0 laù/caây) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ vôùi caùc nghieäm thöùc T3. Ít nhaát laø T2 (16,0 laù/caây) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ vôùi T1. - Giai ñoaïn 10 NST soá laù caø chua giöõa caùc nghieäm thöùc söï sai bieät coù yù nghóa veà maët thoáng keâ. Ít nhaát laø T2 (24,0 laù/caây) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ vôùi T1. Nhieàu nhaát laø T4 (42,7 laù/caây) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veø maët thoáng keâ vôùi T3. - Giai ñoaïn 15 NST soá laù caø chua giöõa caùc nghieäm thöùc söï sai bieät coù yù nghóa veà maët thoáng keâ. Ít nhaát laø T2 (25,7 laù/caây) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ vôùi T1. Nhieàu nhaát laø T4 (52,7 laù/caây) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ vôùi T3. - Giai ñoaïn 20 NST soá laù caø chua giöõa caùc nghieäm thöùc söï sai bieät coù yù nghóa veà maët thoáng keâ. Ít nhaát laø T2 (31,7 laù/caây) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ vôùi T1. Nhieàu nhaát laø T4 (68,0 laù/caây) vaø söï khaùc bieät khoâng coù yù nghóa veà maët thoáng keâ vôùi T3. Vôùi maät soá 103 cfu/g ñaát, khaû naêng gaây ñoäc cho caây caø chua laø raát thaáp. Caùc nghieäm thöùc sinh tröôûng vaø phaùt trieån bình thöôøng, rieâng nghieäm thöùc T3, T4 phaùt trieån maïnh, soá laù vaø chieàu cao caây vöôït troäi hôn haún caùc nghieäm thöùc T1, T2. Ñieàu Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 29 naøy chöùng toû VKÑK coù taùc duïng laøm cho beänh ít hôn, reã phaùt trieån toát hôn, soá laù nhieàu hôn vaø taêng chieàu cao. Nhö vaäy, doøng VKÑK 85 khoâng nhöõng öùc cheá söï sinh saûn cuûa VKGB RST01 maø coøn giuùp cho caây sinh tröôûng vaø phaùt trieån toát hôn. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 30 Hình 4.9: Toång theå caùc nghieäm thöùc treân caây caø chua 5 NST Hình 4.10: Töøng nghieäm thöùc treân caây caø chua 10 NST 4.3 Ñaùnh giaù tính ñoäc cuûa VKGB RST01 treân caây caø chua trong ñieàu kieän nhaø löôùi Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 31 Khi xöû lyù ñaát baèng vi khuaån RST01 vôùi maät soá vi khuaån 1010cfu/gñaát. Sau ñoù, tieán haønh troàng caây caø chua vaøo chaäu ñaát ñeå xaùc ñònh möùc ñoä gaây ñoäc cuûa vi khuaån RST01. Keát quaû trình baøy ôû baûng 3. Sau 3 ngaøy troàng vaøo chaäu ñaát, caùc nghieäm thöùc T2, T3, T4 coù trieäu chöùng baét ñaàu heùo ruû vaø heùo ruû hoaøn toaøn trong khi ñoù T1 laïi sinh tröôûng vaø phaùt trieån bình thöôøng ñieàu naøy chöùng toû caùc nghieäm thöùc T2, T3, T4 heùo ruõ laø do vi khuaån RST01 gaây ra. T1: Sinh tröôûng vaø phaùt trieån bình thöôøng do khoâng xöû lyù VKÑK vaø VKGB. T2: Heùo ruõ nhanh nhaát do chæ xöû lyù VKGB. T3: Maëc duø coù xöû lyù VKÑK tröôùc khi gieo haït nhöng caây vaãn heùo ruû khaù nhanh ñieàu naøy chöùng toû söï sinh saûn cuûa VKÑK laø khoâng kòp so vôùi söï sinh saûn cuûa VKGB. T4: Söï heùo ruõ laø chaäm nhaát do tröôùc khi troàng coù xöû lyù VKÑK, ñieàu naøy chöùng toû VKÑK coù taùc ñoäng ñeán VKGB nhöng söï sinh saûn cuûa VKÑK cuõng khoâng kòp so vôùi vi khuaån gaây beänh neân caây baét ñaàu heùo daàn. Baûng 4.4 AÛnh höôûng cuûa vi khuaån gaây beänh ñeán tyû leä cheát cuûa caây Tyû leä cheát (%) Nghieäm thöùc 3 NST 6 NST 9 NST 12 NST T1 0 0 0 0 T2 16,7 43,3 86,7 100 T3 13,3 33,3 70 100 T4 0 23,33 50 86,67 Ghi chuù: NST: ngaøy sau troàng T1: ñoái chöùng T2: chæ xöû lyù VKGB T3, T4 : xöû lyù VKGB vaø VKÑK Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 32 Trong töøng nghieäm thöùc, tyû leä cheát treân caây caø chua laø khaùc nhau, nhöng taát caû ñeàu heùo ruõ haøng loaït chæ trong moät thôøi gian raát ngaén. Ñieàu ñoù chöùng toû maät soá VKGB trong ñaát laø quaù daøy ñaëc laøm cho VKÑK khoâng sinh saûn ñöôïc daãn ñeán tyû leä caây cheát 100%. Nhö vaäy, möùc ñoä gaây ñoäc cuûa vi khuaån RST01 laø raát maïnh. Khaû naêng phaùt sinh, phaùt trieån cuûa chuùng laø raát nhanh, chæ trong moät thôøi gian ngaén toaøn boä caây troàng ñaõ bò heùo ruõ moät caùch toaøn dieän. Khaû naêng ñoái khaùng cuûa vi khuaån 85 chæ coù taùc duïng trong moät thôøi gian raát ngaén do maät soá vi khuaån RST01 quaù daøy kìm haõm söï sinh saûn cuûa doøng vi khuaån 85. Hình 4.11: Tính ñoäc cuûa VKGB RST01 ôû töøng nghieäm thöùc Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 33 Hình 4.12: Tính ñoäc cuûa VKGB RST01 toång theå 4.4 Ñaùnh giaù khaû naêng phoøng tröø cuûa doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum treân caây caø chua ngoaøi ñoàng ruoäng Khi caây caø chua ñöôïc 15 ngaøy tuoåi, tieán haønh troàng ra ngoaøi ñoàng. Sau 3 ngaøy, töôùi VKÑK 85 vaøo caùc hoác ñaõ ñöôïc ñuïc loã (moãi hoác 100ml), vôùi maät soá 109 VKÑK/ml. Keát quaû ñöôïc trình baøy ôû baûng 4. Baûng 4.5 Tyû leä cheát cuûa caây Tyû leä cheát (%) Nghieäm thöùc 5 NST 10 NST 15 NST 20 NST T1’ 8,3 41,67 78.33 100 T2’ 6,33 17,5 52,45 95 Ghi chuù: NST: ngaøy sau troàng T1’: ñoái chöùng T2’ : xöû lyù VKÑK Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 34 Chæ trong moät thôøi gian ngaén, tyû leä cheát cuûa caây laø raát lôùn, khi nhoå caây thaáy reã vaãn phaùt trieån. Caây cheát coù theå do quaàn theå sinh vaät gaây beänh trong ñaát quaù nhieàu, hoaëc thôøi tieát coù möa daàm hoaëc do beänh moác söông gaây ra. Nhoå 10 caây caø chua, caét moät ñoaïn thaân caây nhuùng phaàn caét gaàn saùt goác vaøo nöôùc caát voâ truøng, quan saùt thaáy choã veát caét coù doøng traéng ñuïc nhö söõa tieát ra, chöùng toû trong caây caø chua coù vi khuaån, trong 10 caây, 8 caây coù vi khuaån tieát ra, chieám tyû leä 80%. Nhö vaäy, khaû naêng phoøng tröø cuûa vi khuaån Pseudomonas fluorescens haàu nhö khoâng coù, coäng vôùi thôøi tieát coù möa to vaøo moãi buoåi chieàu, tyû leä beänh treân caây caø chua phaùt trieån maïnh. Caây cheát haøng loaït chæ trong thôøi gian ngaén. Chöông 5 KEÁT LUAÄN VAØ ÑEÀ NGHÒ 5.1 Keát luaän Khaû naêng ñoái khaùng cuûa caùc doøng Pseudomonas fluorescens vôùi caùc doøng Ralstonia solanacearum treân ñóa petri, trong ñoù coù 3 doøng khaùng maïnh, vaø 2 doøng coù möùc ñoä khaùng töø trung bình ñeán yeáu. Khaû naêng phoøng tröø cuûa doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum raát yeáu khi xöû lyù vi khuaån RST01 vaøo chaäu ñaát vôùi maät soá vi khuaån: 1010 cfu/g ñaát. Tyû leä caây cheát 12 NST laø 100%. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 35 Khaû naêng phoøng tröø cuûa doøng vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi doøng vi khuaån Ralstonia solanacearum raát maïnh khi xöû lyù vi khuaån RST01 vaøo chaäu ñaát vôùi maät soá vi khuaån: 103cfu/g ñaát. Tyû leä caây soáng 20 NST laø 100%. Tyû leä caây cheát ngoaøi ñoàng ruoäng laø 100%. 5.2 Ñeà nghò Tieáp tuïc nghieân cöùu vi khuaån Pseudomonas fluorescens vôùi soá löôïng maãu nhieàu hôn, ñaïi dieän cho nhieàu vuøng vaø thöû nghieäm ñoái khaùng treân caùc loaïi vi khuaån khaùc. Khaûo saùt theâm caùc yeáu toá aûnh höôûng ñeán maät soá vi khuaån trong ñieàu kieän öùng duïng thöïc teá ñeå laøm taêng tính hieäu quaû. Khaûo saùt caùc yeáu toá aûnh höôûng ñeán vieäc saûn xuaát caùc cheá phaåm sinh hoïc ñoái khaùng. TAØI LIEÄU THAM KHAÛO 1. Tieáng Vieät Ñoã Taán Duõng, 2001. Beänh heùo ruõ haïi caây troàng caïn, bieän phaùp phoøng choáng. Nhaø xuaát baûn Noâng Nghieäp, Haø Noäi. Nguyeãn Vaên Heát, 1997. Khaûo saùt beänh cheát heùo caây ñaäu phoäng do vi khuaån Ralstonia solanacearum (Smith) ôû huyeän Cuû Chi – Tp.Hoà Chí Minh. Luaän aùn thaïc só Noâng Nghieäp. Ñaïi Hoïc Noâng Laâm Tp. Hoà Chí Minh. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 36 Vuõ Trieäu Maân vaø Leâ Löông Teà, 1998. Giaùo trình beänh caây noâng nghieäp. Nhaø xuaát baûn Noâng Nghieäp, Haø Noäi. Leâ Löông Teà vaø Vuõ Trieäu Maân, 1999. Beänh vi khuaån vaø virus haïi caây troàng. Nhaø xuaát baûn Giaùo Duïc. Leâ Löông Teà, 2002. Nhaän daïng Ralstonia solanacearum baèng PCR vaø ñaùnh giaù tính khaùng beänh heùo xanhcuûa moät soá gioáng caø chua khaùng vôùi caùc doøng vi khuaån ôû Haø Noäi – Vieät Nam. Hoäi thaûo beänh caây vaø sinh hoïc phaân töû Tröôøng Ñaïi Hoïc Noâng Laâm Tp. Hoà Chí Minh laàn thöù nhaát. 21/6/2002. Tröôøng Ñaïi Hoïc Noâng Laâm Tp. Hoà Chí Minh. Nguyeãn Thò Yeán vaø ctv, 2002. Thaønh phaàn noøi, biovar vi khuaån gaây beänh heùo xanh caây troàng caïn. Hoäi thaûo beänh caây vaø sinh hoïc phaân töû, Tröôøng Ñaïi Hoïc Noâng Laâm Tp. Hoà Chí Minh laàn thöù nhaát. Tröôøng Ñaïi Hoïc Noâng Laâm Tp. Hoà Chí Minh. Leâ Löông Teà, 2002. Phoøng choáng beänh heùo xanh vi khuaån caø chua coù hieäu quaû kinh teá cao baèng bieän phaùp söû duïng roäng raõi caùc gioáng caø chua khaùng beänh, coù naêng suaát cao CLN-1462A vaø P.T 4719A ôû vuøng ñoàng baèng soâng Hoàng. Leâ Nhö Kieåu, Nguyeãn Ngoïc Cöôøng, Ñaøo Thu Haèng, 2003. Phaùt hieän biovar 1 vaø 5 trong quaàn theå vi khuaån Ralstonia solanacearum gaây beänh heùo xanh caø chua. Hoäi nghò Coâng ngheä Sinh hoïc toaøn quoác, Haø Noäi 2003. Phaïm Ñaêng Minh, 2003. Caáu truùc quaàn theå vi khuaån Ralstonia solanaccearum gaây haïi treân caây troàng ôû moät soá tænh phía nam Vieät Nam. Luaän vaên toát nghieäp kyõ sö noâng nghieäp. Tröôøng Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. Hoà Chí Minh. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 37 Nguyeãn Trung Thaønh, 2004. Böôùc ñaàu choïn loïc vaø ñaùnh giaù doøng vi khuaån ñoái khaùng phaân laäp töø ñaát ñeå khoáng cheá naám Rhizoâctnia solani, Sclerotium rolfsii vaø vi khuaån Ralstonia solanaccearum gaây beänh treân caây caø chua. Luaän vaên toát nghieäp kyõ sö noâng nghieäp. Tröôøng Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. Hoà Chí Minh. Phaïm Minh Sang, 2003. Hieäu löïc cuûa cheá phaåm vi khuaån ñoái khaùng vaø kích thích sinh tröôûng trong phoøng tröø beänh khoâ vaèn (Rhizoctonia solani Kuln) treân luùa. Luaän vaên toát nghieäp kyõ sö noâng nghieäp. Tröôøng Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. Hoà Chí Minh. 2. Tieáng nöôùc ngoaøi Hayward A.C.1964, Characterics of Pseudomonas solanacearum. J. Appl. Bacteriol. 27: 205 – 277. Kelman A.1954. The raltionships of pathogencity in Pseudomonas solanacearum to colony appearance on a tetrazolium medium. Phytopathology 44: 693 – 695. Yung-An L., Shu-Chung F., Ling-Ya C. and Kuo-Chiang H., 2001. Isolate of an insertion sequence from of Ralstonia solanacearum race 1 and its potential use for strain characterization and detection. Applied and Environmental Microbiology 67: 3943 – 3950. Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 38 PHUÏ LUÏC I. Baûng 6. AÛnh höôûng cuûa VKÑK ñeán soá laù caây caø chua Soá laù NT LLL 5 NST 10 NST 15 NST 20 NST 1 19 33 36 45 2 24 28 39 39 T1 3 16 25 36 47 T2 1 18 25 27 30 Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 39 2 15 24 25 29 3 15 23 25 36 1 21 31 47 60 2 26 38 53 57 T3 3 18 27 37 63 1 27 44 52 62 2 29 51 57 78 T4 3 25 33 49 64 Ghi chuù: NT: nghieäm thöùc LLL: laàn laëp laïi NST: ngaøy sau troàng 1. Soá laù 5 ngaøy sau khi troàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ nt 3 189.58 63.194 13.00 0.0049 lll 2 50.17 25.083 5.16 0.0497 Error 6 29.17 4.861 Non-additivity 1 2.03 2.029 0.37 Residual 5 27.14 5.428 ------------------------------------------------------------------------ Total 11 268.92 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 21.083 Grand Sum= 253.000 Total Count= 12 Coefficient of Variation= 10.46% * Traéc nghieäm phaân haïng soá laù cuûa caø chua 5 ngaøy sau troàng Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 40 Original Order Ranked Order Mean 1 = 19.70 B Mean 4 = 27.00 A Mean 2 = 16.00 B Mean 3 = 21.70 AB Mean 3 = 21.70 AB Mean 1 = 19.70 B Mean 4 = 27.00 A Mean 2 = 16.00 B  2. Soá laù 10 ngaøy sau khi troàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ nt 3 566.33 188.778 10.01 0.0095 lll 2 148.17 74.083 3.93 0.0812 Error 6 113.17 18.861 Non-additivity 1 75.16 75.163 9.89 Residual 5 38.00 7.601 ------------------------------------------------------------------------ Total 11 827.67 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 31.833 Grand Sum= 382.000 Total Count= 12 Coefficient of Variation= 13.64% * Traéc nghieäm phaân haïng soá laù cuûa caø chua 10 ngaøy sau troàng Original Order Ranked Order Mean 1 = 28.70 B Mean 4 = 42.70 A Mean 2 = 24.00 B Mean 3 = 32.00 AB Mean 3 = 32.00 AB Mean 1 = 28.70 B Mean 4 = 42.70 A Mean 2 = 24.00 B  3. Soá laù 15 ngaøy sau khi troàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ nt 3 1203.00 401.000 21.20 0.0014 lll 2 58.50 29.250 1.55 0.2873 Error 6 113.50 18.917 Non-additivity 1 36.99 36.988 2.42 Residual 5 76.51 15.302 ------------------------------------------------------------------------ Total 11 1375.00 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 40.500 Grand Sum= 486.000 Total Count= 12 Coefficient of Variation= 10.74% * Traéc nghieäm phaân haïng soá laù cuûa caø chua 15 ngaøy sau troàng Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 41 Original Order Ranked Order Mean 1 = 38.00 BC Mean 4 = 52.70 A Mean 2 = 25.70 C Mean 3 = 45.70 AB Mean 3 = 45.70 AB Mean 1 = 38.00 BC Mean 4 = 52.70 A Mean 2 = 25.70 C  4. Soá laù 20 ngaøy sau khi troàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ nt 3 2392.33 797.444 22.55 0.0011 lll 2 21.17 10.583 0.30 0.7518 Error 6 212.17 35.361 Non-additivity 1 4.53 4.531 0.11 Residual 5 207.64 41.527 ------------------------------------------------------------------------ Total 11 2625.67 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 50.833 Grand Sum= 610.000 Total Count= 12 Coefficient of Variation= 11.70% * Traéc nghieäm phaân haïng soá laù cuûa caø chua 20 ngaøy sau troàng Original Order Ranked Order Mean 1 = 43.70 BC Mean 4 = 68.00 A Mean 2 = 31.70 C Mean 3 = 60.00 AB Mean 3 = 60.00 AB Mean 1 = 43.70 BC Mean 4 = 68.00 A Mean 2 = 31.70 C II. Baûng 7. AÛnh höôûng cuûa VKÑK ñeán chieàu cao caây caø chua Chieàu cao caây (cm) NT LLL 5 NST 10 NST 15 NST 20 NST 1 19,5 31,5 37,5 40,5 2 24 33 37 39 T1 3 17 26,5 31,5 34,5 1 16,5 19,5 23,5 24 2 19,5 23,5 25 26 T2 3 25 27,5 29 30,5 Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 42 1 24,5 40 48,5 57,5 2 27,5 42,5 48,5 61 T3 3 24 38,5 46 57 1 27 41 47,5 56 2 28,5 47,5 55 61,5 T4 3 31,5 49,5 57 65 Ghi chuù: NT: nghieäm thöùc LLL: laàn laëp laïi NST: ngaøy sau troàng 1. Chieàu cao 5 ngaøy sau troàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ NT 3 163.73 54.576 5.52 0.0368 LLL 2 20.67 10.333 1.04 0.4080 Error 6 59.33 9.889 Non-additivity 1 0.63 0.632 0.05 Residual 5 58.70 11.740 ------------------------------------------------------------------------ Total 11 243.73 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 23.708 Grand Sum= 284.500 Total Count= 12 Coefficient of Variation= 13.26% Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 43 * Traéc nghieäm phaân haïng chieàu cao cuûa caø chua 5 ngaøy sau troàng Original Order Ranked Order Mean 1 = 20.20 B Mean 4 = 29.00 A Mean 2 = 20.30 B Mean 3 = 25.30 AB Mean 3 = 25.30 AB Mean 2 = 20.30 B Mean 4 = 29.00 A Mean 1 = 20.20 B  2. Chieàu cao 10 ngaøy sau troàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ NT 3 801.23 267.076 22.27 0.0012 LLL 2 47.54 23.771 1.98 0.2183 Error 6 71.96 11.993 Non-additivity 1 0.68 0.676 0.05 Residual 5 71.28 14.257 ------------------------------------------------------------------------ Total 11 920.73 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 35.458 Grand Sum= 425.500 Total Count= 12 Coefficient of Variation= 9.77% * Traéc nghieäm phaân haïng chieàu cao cuûa caø chua 10 ngaøy sau troàng Original Order Ranked Order Mean 1 = 30.30 BC Mean 4 = 46.00 A Mean 2 = 25.20 C Mean 3 = 40.30 AB Mean 3 = 40.30 AB Mean 1 = 30.30 BC Mean 4 = 46.00 A Mean 2 = 25.20 C  2. Chieàu cao 15 ngaøy sau troàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ NT 3 1346.75 448.917 34.04 0.0004 LLL 2 12.54 6.271 0.48 0.6431 Error 6 79.12 13.187 Non-additivity 1 8.24 8.244 0.58 Residual 5 70.88 14.176 ------------------------------------------------------------------------ Total 11 1438.42 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 40.417 Grand Sum= 485.000 Total Count= 12 Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 44 Coefficient of Variation= 8.99% * Traéc nghieäm phaân haïng chieàu cao cuûa caø chua 15 ngaøy sau troàng Original Order Ranked Order Mean 1 = 35.30 B Mean 4 = 53.20 A Mean 2 = 25.80 B Mean 3 = 47.30 A Mean 3 = 47.30 A Mean 1 = 35.30 B Mean 4 = 53.20 A Mean 2 = 25.80 B  2. Chieàu cao 20 ngaøy sau troàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ NT 3 2422.90 807.632 62.09 0.0001 LLL 2 14.29 7.146 0.55 0.6038 Error 6 78.04 13.007 Non-additivity 1 4.81 4.808 0.33 Residual 5 73.23 14.647 ------------------------------------------------------------------------ Total 11 2515.23 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 46.042 Grand Sum= 552.500 Total Count= 12 Coefficient of Variation= 7.83% * Traéc nghieäm phaân haïng chieàu cao cuûa caø chua 20 ngaøy sau troàng Original Order Ranked Order Mean 1 = 38.00 B Mean 4 = 60.80 A Mean 2 = 26.80 C Mean 3 = 58.50 A Mean 3 = 58.50 A Mean 1 = 38.00 B Mean 4 = 60.80 A Mean 2 = 26.80 C  Luaän vaên toát nghieäp SVTH: Hoà Thanh Hoaøng Download» Agriviet.com 45 GIÔÙI THIEÄU VEÀ TAØI LIEÄU Tài liệu bạn đang xem được download từ website WWW.AGRIVIET.COM WWW.MAUTHOIGIAN.ORG »Agriviet.com là website chuyên đề về nông nghiệp nơi liên kết mọi thành viên hoạt động trong lĩnh vực nông nghiệp, chúng tôi thường xuyên tổng hợp tài liệu về tất cả các lĩnh vực có liên quan đến nông nghiệp để chia sẽ cùng tất cả mọi người. Nếu tài liệu bạn cần không tìm thấy trong website xin vui lòng gửi yêu cầu về ban biên tập website để chúng tôi cố gắng bổ sung trong thời gian sớm nhất. »Chúng tôi xin chân thành cám ơn các bạn thành viên đã gửi tài liệu về cho chúng tôi. Thay lời cám ơn đến tác giả bằng cách chia sẽ lại những tài liệu mà bạn đang có cùng mọi người. Bạn có thể trực tiếp gửi tài liệu của bạn lên website hoặc gửi về cho chúng tôi theo địa chỉ email Webmaster@Agriviet.Com Lưu ý: Mọi tài liệu, hình ảnh bạn download từ website đều thuộc bản quyền của tác giả, do đó chúng tôi không chịu trách nhiệm về bất kỳ khía cạnh nào có liên quan đến nội dung của tập tài liệu này. Xin vui lòng ghi rỏ nguồn gốc “Agriviet.Com” nếu bạn phát hành lại thông tin từ website để tránh những rắc rối về sau. Một số tài liệu do thành viên gửi về cho chúng tôi không ghi rỏ nguồn gốc tác giả, một số tài liệu có thể có nội dung không chính xác so với bản tài liệu gốc, vì vậy nếu bạn là tác giả của tập tài liệu này hãy liên hệ ngay với chúng tôi nếu có một trong các yêu cầu sau : • Xóa bỏ tất cả tài liệu của bạn tại website Agriviet.com. • Thêm thông tin về tác giả vào tài liệu • Cập nhật mới nội dung tài liệu www.agriviet.com